小鼠外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)

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更新時間：2025-04-09

小鼠外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)

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細胞簡介：

小鼠外周血DC分離自外周血，由外周血單核細胞誘導(dǎo)而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細胞呈圓形，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應(yīng)中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不能激活T細胞的第二信號，可導(dǎo)致T細胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導(dǎo)而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠外周血樹突狀(成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：圓形，樹突狀

傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠外周血樹突狀(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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